IHC-P对照

合适的对照对评估染色特异性至关重要。而阴性对照对鉴别假阳性染色也是必不可少。

SYSY推荐进行以下染色对照来支持你的染色特异性。

无初级抗体和二级系统的载玻片

在IHC中进行显色检测，阻断不合适时，内源性过氧化物酶或者碱性磷酸酶可产生假阳性染色。在染色实验方案中省略初级抗体和二级系统将揭示内源性酶活性。使用3% H₂O₂可阻断内源性过氧化物酶。而内源性碱性磷酸酶则可由1 mM左旋咪唑阻断。

其它遗传于组织自身的假阳性信号由于是黄褐色，很容易会与DAB信号混淆，包括：血铁质（例如肝脏、脾脏和骨髓），胆红素（肝脏）脂褐质（例如神经细胞、心脏和肝脏），还有角膜内皮细胞（棕色眼）和人类皮肤细胞中的黑色素。

在荧光IHC-P中，组织自身荧光可能会与背景中特异信号或者非特异信号混淆。

无初级抗体对照
无初级抗体的阴性对照对从二级系统中鉴别假阳性染色是非常必要的。
假阳性染色可由二级抗体的非特异性结合引起。可使用一种已预先吸附与你组织样品来源相同物种的二级抗体（例如在小鼠组织中检测一种大鼠初级抗体时，可使用预先吸附小鼠的抗-大鼠二级抗体）。
当在小鼠组织中使用小鼠初级抗体时，使用一个M.O.M.试剂盒可使内源性小鼠IgG染色减少。
在使用ABC方法时，假阳性染色可由内源性生物素引起。用多余的未标记的(Strept-)亲和素阻断内源性生物素，随后用游离生物素（例如亲和素-生物素试剂盒）阻断剩余的(Strept-)亲和素位点。

阳性组织类型对照
使用已知可表达高水平目标蛋白的组织类型。此对照将验证你的染色实验方案是否有效。

阴性组织类型对照
使用已知不表达目标蛋白的组织类型。当使用物种特异性抗体时，这可能是来自其它物种的组织样品。而来自敲除或者敲落模型中的组织则尤其有用。